基于SYBR Green检测小麦黄花叶病毒的两步法qPCR

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘成

作者： 刘成;铃木孝子;佐久间俊;宋健民;李豪圣;刘爱峰;曹新有;韩冉;宫文萍;刘建军;小松田隆夫

作者机构：

关键词： 小麦黄花叶病毒;两步法qPCR;酶联免疫吸附剂测定法

期刊名称： 山东农业科学

ISSN： 1001-4942

年卷期： 2016 年 48 卷 07 期

页码： 118-124+132

摘要： 小麦黄花叶病毒病是其常发病,常造成严重减产。为建立可用于定量检测小麦黄花叶病毒(WYMV)拷贝数的q PCR方法,本研究对不同来源的WYMV小种序列进行比对分析,在序列保守区域设计引物11对,对其退火温度进行优化,进而建立各引物的q PCR标准曲线。结果发现,11对引物的扩增效率在50.60%~116.04%之间,仅2对引物可用于后续研究,扩增效率分别为97.21%(WY-05和WY-06)和91.85%(WY-F2和WY-R2)。利用其中的WY-F2和WY-R2对高抗和高感WYMV的小麦品种进行分析,结果显示,抗感小麦品种WYMV拷贝数差异极显著。对抗感分离群体266个单株进行分析,发现该q PCR方法灵敏度显著高于酶联免疫吸附剂测定法,更适用于抗感杂交分离群体的表型鉴定,因而可以用于抗WYMV基因的遗传定位与图位克隆工作。

分类号： S435.121.49

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