长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA的克隆与原核表达及其表达产物的酶活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张萍

作者： 张萍;刘光远;田占成;谢俊仁;罗金

作者机构：

关键词： 长角血蜱;酸性磷酸酶;克隆;原核表达;酶活性分析

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2011 年 05 期

页码： 484-489

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,得到了长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA序列。利用生物信息学方法对该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析,同时构建了系统发育树。采用PCR方法扩增目的基因完整的开放阅读框,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Wes-tern-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性,同时进行体外酶活性分析。结果表明,成功获得了长角血蜱酸性磷酸酶全长序列,体外高效诱导表达了约67.0 ku的重组蛋白。Western-blot表明该蛋白具有很强的反应原性,且在pH5.0时,该酶水解对硝基苯磷酸二钠的能力最强。

分类号： S852.7

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