流行性出血病病毒VP7蛋白的表达及其单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 钟匀汝

作者： 钟匀汝;张雨;宋昱庆;户鑫兵;田占成;关贵全;罗建勋;艾军;何俊峰;殷宏;独军政

作者机构：

关键词： 流行性出血病病毒;VP7蛋白;蛋白表达与纯化;单克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 55 卷 008 期

页码： 1050-1056

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 流行性出血病是由流行性出血病病毒（EHDV）经库蠓叮咬传播感染牛、羊、鹿等反刍动物的非接触性传染病，EHDV VP7蛋白是该病诊断的靶标蛋白。本研究参照GenBank中已发表的基因序列经密码子优化后人工合成EHDV VP7基因，将该基因克隆至表达质粒pET-28a，构建重组质粒pET-EHDV VP7，将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)，以IPTG诱导表达且优化表达条件，通过Ni-NTA亲和层析法对表达的VP7蛋白进行纯化并用不同浓度咪唑透析复性，用复性后的VP7蛋白免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备抗VP7蛋白单克隆抗体。通过间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹和细胞免疫荧光试验验证单克隆抗体的特异性。结果显示，利用大肠杆菌表达系统成功表达重组EHDV VP7蛋白，纯化后制备了2株稳定分泌针对EHDV VP7蛋白的单克隆抗体，分别命名为1D10和3C11，这2株单克隆抗体不仅能与大肠杆菌表达的重组EHDV VP7蛋白反应，而且也能与真核细胞表达的重组EHDV VP7蛋白结合，同时这2株单克隆抗体与重组蓝舌病毒VP7蛋白和重组非洲马瘟病毒VP7蛋白不发生反应。本研究成功表达和纯化出了重组EHDV VP7蛋白，制备了特异性抗VP7蛋白单克隆抗体，这为研究EHDV VP7蛋白的结构功能以及诊断方法的建立奠定了基础。

分类号： S852.65

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