H3N2亚型猪流感病毒M1基因克隆及表达特性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭林

作者： 郭林;王晓杜;刘庆伟;沈阳;邱亚峰;李向东;罗满林;马志永

作者机构：

关键词： 猪流感病毒;M1基因;克隆;基因表达

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2009 年 25 卷 05 期

页码： 42-48

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从H3N2亚型猪流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取病毒基因组RNA,采用RT-PCR方法克隆M1全长基因,将M1基因亚克隆至pET-28a(+)表达载体中,构建重组表达质粒pET-28a-M1,将该重组质粒转化大肠杆菌BL21并经IPTG诱导表达。诱导产物经SDS-PAGE电泳分析显示重组蛋白M1获得大量表达,表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备多克隆抗体。Westernblotting检测结果表明制备的抗M1蛋白多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的M1蛋白和病毒感染细胞的病毒M1蛋白。构建M1基因真核重组质粒p3xFLAG-CMV-7.1-M1并转染Vero细胞,Western blotting检测表明抗M1蛋白多克隆抗体可以识别在Vero细胞中得到表达的M1蛋白,成功建立M1基因的真核表达系统。分析了病毒感染过程中M1蛋白的变化及其作为病毒复制指示分子的可能性。鼠源M1蛋白多克隆抗体的制备和M1基因真核重组表达质粒的构建,为进一步研究猪流感病毒的复制机理以及M1蛋白在病毒复制过程中的生物学功能奠定了基础。

分类号： S852.65

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