Pladienolide B对牛胚胎干细胞多能性相关基因表达及细胞活力的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵芳

作者： 赵芳;丁强;夏淑雯;高运东;兰国成;林志平;王慧利;仲跻峰

作者机构：

关键词： 牛胚胎干细胞;Pladienolide B;剪接体;多能性相关基因;细胞活力

期刊名称： 中国农业科学

ISSN：

年卷期： 2023 年 011 期

页码： 2186-2201

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】牛胚胎干细胞（bovine embryonic stem cells,BESCs）因具备较高的多能性，在牛品种保存、品种选育及研究家畜胚胎发育调控机制方面具有重要的应用价值。然而，BESCs多能性维持及分化调控的研究相对缺乏，很多机制仍不清楚。【目的】探究不同浓度Pladienolide B（PlaB）对BESCs多能标记基因、全能标记基因、胚胎细胞谱系基因表达及细胞活力的影响，为提高BESCs多能性提供参考和理论依据。【方法】利用免疫荧光检测牛BESCs多能标记基因的表达，利用实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR）检测不同浓度PlaB对BESCs剪接体、全能标记基因及胚胎细胞谱系基因表达的影响，利用RT-qPCR和Western Blot分别检测不同浓度PlaB对BESCs多能标记基因mRNA和蛋白表达的影响，利用CCK8和EDU染色检测不同浓度PlaB对BESCs增殖的影响。【结果】RT-qPCR结果显示，PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L-1时显著下调EPSCM-BESCs中SF3B1和SF3B2的mRNA表达水平；PlaB浓度为1.5nmol·L-1时，CTFR-BESCs中SF3B1和SF3B2的mRNA表达下降；PlaB浓度范围为0.5—1.5 nmol·L-1时，CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs的SF3B4和SF3B5的mRNA表达水平呈剂量依赖性增加。此外，PlaB显著下调CTFR-BESCs中SF3B6的mRNA表达。PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L-1时，EPSCM-BESCs和CTFR-BESCs中剪接体LSM4的mRNA表达显著下调。PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L-1时，显著下调CTFR-BESCs的EFTUD2 mRNA表达水平；PlaB浓度为1—1.5 nmol·L-1时能显著下调BEPSCM-BESCs的EFTUD2 mRNA表达水平。浓度为0.5—1.5 nmol·L-1范围内，PlaB均以剂量依赖性上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中多能标记基因OCT4、SOX2及NANOG的mRNA表达水平和蛋白水平。在PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L-1范围内，PlaB以剂量依赖性上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中全能标记基因MDM2、PID1及BTG2的mRNA表达水平，而下调DDIT4和PDRG1的mRNA表达水平。CTFR-BESCs中添加PlaB均上调胚胎细胞谱系基因的表达，而EPSCM-BESCs中添加PlaB显著降低GATA4、GATA6、SOX7等胚胎细胞谱系基因的表达，但是对于ZIC1没有显著影响。随着PlaB剂量增加和处理时间延长，CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs细胞活力均呈下降趋势，但CTFR-BESCs比EPSCM-BESCs更敏感。【结论】PlaB显著上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中多能标记基因和部分全能标记基因的表达；降低EPSCM-BESCs中胚胎细胞谱系基因的表达和细胞活力。PlaB对两种BESCs发挥作用的浓度及对基因表达的影响并不完全一致。由于PlaB降低BESCs的细胞活力，仍需要进一步研究以优化培养体系。

分类号： S823.2

  • 相关文献

[1]大麦游离小孢子的活力与耐盐性. 刘成洪,何婷,王亦菲,郭桂梅,高润红. 2014

[2]野生笃斯越桔总花青素对SPCA-1细胞活力抑制及机理. 姜浩瀚,吕留庄,景志行,汪雯翰,许剑锋. 2019

[3]油酸对奶牛乳腺上皮细胞内甘油三酯含量和乳脂肪合成相关基因表达的影响. 邢媛媛,李红磊,李大彪,胡红莲,张兴夫,高民. 2017

[4]草鱼肝细胞原代培养的培养基选择与优化. 张洪玉,王海波,赵明军,吕永辉,胡鲲,杨先乐,夏磊. 2017

[5]维生素D对牛卵巢卵泡颗粒细胞的影响. 靳光,张元庆,张喜忠,王曦,王栋材,李博,薛艳蓉. 2015

[6]热应激造成奶牛乳腺上皮细胞损伤并影响乳合成相关载体的基因表达. 权素玉,张源淑,卜登攀. 2016

[7]小麦小孢子培养影响因素研究. 付亮,徐鹏亮,李洋,周思远,范永胜,马华平,郭战备,李永珍,蒋志凯,胡卫国. 2024

[8]甲醇对花鲈动脉球和脑细胞系细胞形态、活力及凋亡相关基因的影响. 姚晓晓,闫路路,赵超,王鹏飞,张博,邱丽华. 2023

[9]RPL11基因稳定敲低细胞系的构建及验证. 刘伟,郭佩东,贾楠楠,孙英杰,谭磊,刘炜玮,仇旭升,廖瑛,宋翠萍,丁铲,孟春春. 2021

[10]人参细胞TTC-脱氢酶活力测定条件的优化. 王晗,雷秀娟,宋娟,尹红新,姚丽娜,梁韶,侯志芳,王英平. 2016

[11]鸭胚成纤维细胞培养、传代及保存方法的研究. 许静,李进军,熊胜,陈黎,杨倩,卢立志. 2012

[12]不同土壤水分处理下冬小麦细胞活力差异比较. 付连双,王晓楠,李卓夫,谢冬微,孙莹璐,郑伟. 2014

作者其他论文 更多>>

微信小程序