表达LacZ基因的重组山羊痘病毒的构建及其生物学特征研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王芳

作者： 王芳;刘胜旺;邵昱昊;陈洪岩

作者机构：

关键词： 重组山羊痘病毒;胸苷激酶基因(TK);β-半乳糖苷酶基因(LacZ)

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2007 年 29 卷 09 期

页码： 655-660

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在山羊痘病毒(Goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(Thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体质粒。将痘苗病毒(Vaccinia virus,VV)晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnⅠ酶切位点,经酶切、PCR鉴定筛选出阳性重组子,命名为pTK-LacZ。质粒经纯化后用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸(Bovine testis,BT)细胞,待出现80%以上的细胞病变时收获病毒,经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定,获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒,命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示,LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力、生长特性与亲本株相似,保持原有疫苗株的生长特性,且在BT细胞和羔羊睾丸(Lamb testis,LT)细胞连续传20代遗传性状仍很稳定。本研究筛选、纯化的rGPV-LacZ为进一步研制表达外源基因的重组GPV活载体多价疫苗奠定了基础。

分类号： S852.65

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