p53基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miRNA-2127靶向关系的验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张玉霞

作者： 张玉霞;袁小远;王友令;孟凯

作者机构：

关键词： p53;miRNA-2127;双荧光素酶报告系统

期刊名称： 山东农业科学

ISSN： 1001-4942

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 14-17

摘要： 为了验证miRNA-2127与p53基因的靶向关系,利用生物信息学软件预测p53与miRNA-2127的结合位点,全基因合成法合成该结合位点的野生型与突变型模板,并将其克隆到pmiR-RB-REPORT~(TM)双荧光素酶报告载体中,构建野生型与突变型重组双荧光素酶报告质粒。将293T细胞分为4组,分别共转染野生型报告质粒+阴性对照(NC)、野生型报告质粒+miRNA-2127、突变型报告质粒+NC、突变型报告质粒+miRNA-2127。检测各组细胞中荧光素酶活性差异,结果显示:共转染了野生型报告质粒+miRNA-2127的293T细胞与共转染了野生型报告质粒+NC组相比,荧光素酶活性显著降低(P<0.05);且突变型报告质粒+miRNA-2127组的相对荧光素酶活性显著高于野生型报告质粒+miRNA-2127(P<0.05),说明miRNA-2127能够靶向调控p53基因,且结合位点位于3′UTR区369—375间。

分类号： Q78

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