非洲猪瘟病毒K205R蛋白重组腺病毒载体的构建及小鼠免疫效力评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 何宇恒

作者： 何宇恒;刘雪婷;庞忠宝;翟文竹;黄颖;蒋思文;吉日木图;贾红;李焕荣

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟;K205R;重组腺病毒;免疫效力

期刊名称： 中国兽医杂志

ISSN： 0529-6005

年卷期： 2023 年 005 期

页码： 12-18

收录情况： 北大核心

摘要： 为了研制安全有效的非洲猪瘟（ASF）疫苗，本研究根据非洲猪瘟病毒（ASFV） Georgia 2007/1株基因组序列合成ASFV K205R基因，通过同源重组技术构建重组腺病毒Ad5-ASFV-K205R,使用Western blot检测K205R非结构蛋白的表达情况，PCR检测其遗传稳定性，腺病毒滴度检测试剂盒测定其滴度。使用重组腺病毒免疫BALB/c小鼠，通过ELISA测定血清K205R特异性抗体，采用多因子检测试剂盒测定血清中IFN-γ和IL-4细胞因子含量，采用CCK8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果显示，成功包装出重组腺病毒Ad5-ASFV-K205R,能够正确表达K205R融合蛋白；接种293T细胞并连续传代20代，均可稳定遗传，病毒滴度可达9.5×1010 PFU/mL;ELISA结果显示，小鼠一免后7～21 d可检测到K205R特异性抗体，并在二免后14 d内产生更高的抗体水平；K205R蛋白能显著刺激免疫小鼠脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4,同时也能显著刺激脾脏淋巴细胞增殖（P＜0.05）。结果表明，Ad5-ASFV-K205R重组腺病毒免疫小鼠能诱导机体的体液免疫应答和细胞免疫应答，具有很好的应用潜能，为进一步研发ASF疫苗提供基础。

分类号： S852.651

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