基于AncBE4max系统精准编辑绵羊成纤维细胞FGF18基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 蒙亚琦

作者： 蒙亚琦;王嵩;杨鹏;于航;姚旭东;郭延华;唐红;张译元;王立民;周平

作者机构：

关键词： AncBE4max;成纤维细胞生长因子18;基因编辑;单碱基编辑;绵羊成纤维细胞

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2025 年 41 卷 010 期

页码： 313-320

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】成纤维细胞生长因子18(FGF18)作为毛囊周期的关键调控分子，对毛发生长、毛囊发育具有核心调控作用，而在绵羊等家畜中，其调控羊毛生长的功能与分子机制尚未明晰。基于此，建立一种精准的绵羊成纤维细胞生长因子18(FGF18)单碱基突变系统，利用单碱基编辑系统对绵羊FGF18基因进行定点编辑，探索该技术在农牧业基因改良中的应用潜力，为未来提高羊毛产量提供理论依据。【方法】根据绵羊成纤维细胞FGF18基因的第3、4外显子序列设计并合成了3个单导向RNA(single guide,sgRNA)及其互补链，将退火连接形成的sgRNA分别克隆至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin表达质粒中。通过电转染方式，将含有特异性sgRNA的U6表达质粒与AncBE4max质粒共转染至绵羊成纤维细胞，转染72 h后对细胞进行测序验证。【结果】PCR扩增的FGF18基因片段经T-A克隆后，测序结果表明在FGF18基因的第3、第4外显子内成功引入了终止密码子。通过筛选和鉴定，成功获得了2个可有效定点编辑绵羊成纤维细胞FGF18基因的sgRNA(sg1和sg3)，其编辑效率分别为13.8%和36.4%。【结论】建立的基于AncBE4max系统的绵羊成纤维细胞FGF18基因单碱基编辑系统，可实现外显子区域终止密码子的精准引入，并筛选出sgRNA-sg1和sgRNA-sg3两个有效编辑靶点。

分类号： S826

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