A型口蹄疫病毒多基因重组腺病毒载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙普

作者： 孙普;卢曾军;刘霞;李平花;白兴文;郭建宏;包慧芳;刘在新

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;腺病毒载体;体外连接

期刊名称： 甘肃农业大学学报

ISSN： 1003-4315

年卷期： 2008 年 43 卷 04 期

页码： 17-22

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用体外连接法构建了含有A型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A和3C或3ABC基因的重组腺病毒表达载体.利用PCR技术分别扩增得到P1-2A、3C和3ABC基因,经XbaⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/KpnⅠ双酶切之后,与XbaⅠ/KpnⅠ双酶切的穿梭载体pShuttle2大片段连接,获得重组穿梭质粒pSh-P12a3c和pSh-P12a3abc.然后用I-CeuⅠ和PI-SceⅠ双酶切穿梭质粒回收目的基因表达盒,通过体外连接法将目的基因表达盒与BD Adeno-X Vi-rus DNA连接,转化DH5α感受态菌.获得两个重组腺病毒质粒分别命名为A-P12a3c和A-P12a3abc,经PCR、酶切及测序鉴定正确.用PacⅠ酶切后转染HEK293细胞,取转染细胞裂解液上清连续传至第5代时,在24~48 h内细胞完全病变.分别提取第3、7代病毒DNA,可扩增出目的基因,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且能稳定传代.

分类号： S852.5

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