表达鸡补体因子C3d基因重组杆状病毒的构建及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙盈

作者： 孙盈;闫敏鑫;黄秀芬;孔瑞丽;黄金海;李永清

作者机构：

关键词： 补体因子C3d;重组杆状病毒;pFB-LIC-Bse;蛋白表达

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2015 年 35 卷 08 期

页码： 1254-1259

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研制鸡体内补体因子C3d抗体的检测方法,采用RT-PCR方法从鸡肝脏组织细胞的总RNA中扩增出1 002bp的鸡补体因子C3d基因全长,然后将其克隆到杆状病毒载体pFB-LIC-Bse中获得重组质粒pFB-C3d。将pFB-C3d转化到带有杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-C3d。再将该重组杆粒转染到昆虫细胞sf9中,通过病毒拯救技术构建携带C3d基因的重组杆状病毒。Western blot试验结果表明,重组杆状病毒能在昆虫细胞sf9中表达出大小约为35 000的C3d-his融合蛋白。以该融合蛋白作为抗原建立的Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)显示,经C3d-M2-GST融合蛋白免疫的鸡血清能够与杆状病毒表达的C3d结合,说明本研究构建的重组杆状病毒可以用来检测C3d作为分子佐剂及其融合蛋白免疫鸡后产生针对C3d自身的抗体,为今后建立体内C3d水平监测的指示系统奠定基础。

分类号： S852.4

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