猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张永富

作者： 张永富;韩春华;林健;刘月焕;韦海涛;祝俊杰;赵景义;李栋梁;马国文;布日额;李明刚;张婷;刘永宏;马明;张秋雨

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;ORF7基因;表达;纯化;免疫学活性

期刊名称： 安徽农业科学

ISSN： 0517-6611

年卷期： 2009 年 37 卷 10 期

页码： 4439-4442+4445

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。[结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。

分类号： S858.28

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