利用易错PCR随机突变技术突变EPSPS基因研究草甘膦抗性机理

文献类型： 中文期刊

第一作者： 梁爱敏

作者： 梁爱敏;刘柱;张怀江;刘秀敏;陈明;陆伟;李国勋;林敏

作者机构：

关键词： 易错PCR;随机突变;草甘膦抗性;EPSPS基因;二级结构预测

期刊名称： 高技术通讯

ISSN： 1002-0470

年卷期： 2004 年 14 卷 012 期

页码： 37-42

收录情况： EI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 运用易错PCR介导的随机突变技术使高抗草甘膦的菌株的5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合酶 (5-ENOLPYRUVYLSHIKIMATE-3-PHOSPHATE,EPSPS) 基因发生随机突变,转入EPSPS基因缺陷型的大肠杆菌ER2799中,通过互补试验获得对草甘膦抗性明显降低的突变株AZ100.测序结果发现AZ100的EPSPS基因与未突变基因相比,碱基序列发生了两个位点变化,第792位的碱基由鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T),第1203位的碱基由胞嘧啶(C)突变为鸟嘌呤(G).氨基酸序列也发生了相应的变化,第264位由甘氨酸(GLY)突变为缬氨酸(VAL),第401位由丙氨酸(ALA)突变为甘氨酸(GLY).二级结构预测显示此两个突变的氨基酸的位点恰好位于EPSPS与底物结合的关键部位.这两个氨基酸位点的突变,导致EPSPS在有草甘膦存在的情况下活性降低,从而导致菌株的草甘膦抗性降低.将这两个突变的碱基位点与美国的专利保护位点比较,发现这两个突变位点均不在专利保护范围之内.

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