基于非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的间接ELISA检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王兆贵

作者： 王兆贵;赵亚茹;杨吉飞;牛庆丽;刘银光;敬梦瑶;杨赛霞;吕欣倩;刘猛;姚永海;关贵全;刘志杰;殷宏

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟;非洲猪瘟病毒;蛋白纯化;间接ELISA

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2021 年 004 期

页码： 403-411

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的一种危害性极强的病毒性疾病,该病的发生和流行对全球养猪业、猪肉食品供应及经济发展造成了巨大影响。ASFV基因组较大、编码蛋白众多,但目前很多病毒蛋白的功能尚不清楚。由于缺乏有效的治疗措施和安全的疫苗,所以ASF的防控及疫区的净化仍然面临巨大挑战,而早期、快速、可靠的实验室诊断仍然是该病防控的重要手段。本研究以ASFV基因Ⅱ型毒株的基因组为模板,扩增A104R、B602L、CP204L （P30）、B646L（P72）和K205R基因,并将其克隆至表达载体pET-30a,构建原核表达质粒,经IPTG诱导后表达5种病毒蛋白,其中p A104R、pK205R为可溶性表达,P30、P72、pB602L为包涵体表达。经Western-blot分析鉴定蛋白的抗原性,五种原核表达的蛋白都能够和ASF阳性血清发生特异性反应,通过比较,筛选出pA104R作为最佳诊断抗原,并初步建立了ASFV抗体检测间接ELISA方法。该方法能够敏感、特异的检测ASFV阳性血清,而与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病病毒（PRV）、口蹄疫病毒（FMDV）阳性血清均无交叉反应。利用建立的间接ELISA方法与商品化间接ELISA抗体检测试剂盒平行检测田间样本,结果表明,本研究建立的方法与商品化试剂盒之间的符合率达到94.7%（142/150）。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法能够用于ASF血清抗体的检测。

分类号： S852.651

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