棉铃虫中肠cDNA文库的构建及EST分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 邹朗云

作者： 曹广春;张谦;张彦;梁革梅;吴孔明;郭予元

作者机构：

关键词： 棉铃虫;中肠;cDNA文库;表达序列标签(EST);序列分析

期刊名称： 昆虫学报

ISSN： 0454-6296

年卷期： 2011 年 54 卷 07 期

页码： 3-9

收录情况： CSTPCD

摘要： 中肠是苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)发挥作用的主要部位,中肠上很多蛋白被认为是Bt毒素的结合蛋白。为了探索棉铃虫Helicoverpa armigera对Bt的抗性机制,我们运用RNA转录过程中的5'末端转换机制(Switching Mechanism at5'end of the RNA Transcript,SMART)技术构建了棉铃虫中肠的cDNA文库。先提取棉铃虫5龄幼虫中肠组织的总RNA,合成双链cDNA,经过均一化处理后,酶切、连接载体、转化到大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞,最后进行滴度测试、文库扩增并进行EST序列测定。对该文库质量分析表明:文库滴度为2×106pfu/mL,重组率为100%,平均插入片段大于1kb,全长率为50%。最终成功得到1098条表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)序列,经Phrap程序聚类拼接后得到789条单基因簇(unigene),包括132个重叠群(congtigs)和657个单拷贝(singlets)。将聚类拼接后的789条ESTs序列在NT,NR和SWISSPORT库中进行本地化搜索,比对后发现:218条序列(27.62%)没有注解;119条序列(15.08%)注解不明确;452条序列(57.29%)有功能注解,并表达300多种基因产物。构建的文库各项指标均达到要求,该文库的构建为棉铃虫中肠各类基因的克隆及功能分析奠定了基础。

分类号： S435.622.3

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