慢病毒介导稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 滑留帅

作者： 滑留帅;王璟;白杰;朱肖亭;陈付英;于翔;楚秋霞;辛晓玲;徐照学;赵洪昌;王二耀

作者机构：

关键词： FABP4基因;慢病毒;小尾寒羊;原代成纤维细胞

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 121-126

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 构建1株能够稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系,用于小尾寒羊未来的品种保护、开发与利用,首先利用组织块培养法制备了小尾寒羊原代成纤维细胞,然后利用全基因合成法克隆了绵羊FABP4基因,并构建了过表达FABP4的慢病毒载体。经过包装后,使用获得的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞,最后应用Western Blot鉴定FABP4蛋白的过表达水平。结果表明,经过传代2~3次后,得到纯度较高的小尾寒羊原代成纤维细胞。滴度测定表明,当在96孔板中添加病毒原液量为10~(-4)μL时,观测不到荧光。当添加量为10~(-3)μL,能够观测到荧光,说明获得慢病毒的滴度为1×10~6TU/m L以上。利用制备的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并经过嘌呤霉素筛选后,在荧光显微镜下所有细胞均能观察到绿色荧光。应用Western Blot分析发现,在对照组几乎检测不到FABP4蛋白的表达,而在病毒感染组则能够清晰的观察到FABP4蛋白的表达,说明成功制备了稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系。

分类号： S826

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