文献类型： 中文期刊
第一作者： 王浩杰
作者： 王浩杰;毕津豪;冯娜;赵永坤;王玮琦;王铁成;李月涛;闫飞虎;杨松涛;夏咸柱
作者机构：
关键词： 小反刍兽疫;小反刍兽疫病毒;血凝素蛋白;融合蛋白;多克隆抗体
期刊名称： 中国病原生物学杂志
ISSN： 1673-5234
年卷期： 2022 年 17 卷 004 期
页码： 380-387
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的 对小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants Virus,PPRV)强毒株 China/Tibet/Geg/07-30 血凝素蛋白H和融合蛋白F的主要抗原表位区进行原核表达,并制备兔抗PPRV H和F蛋白多克隆抗体.方法 根据Gen-Bank上公布的PPRV China/Tibet/Geg/07-30(GenBank FJ905304.1)株H和F蛋白的基因序列构建重组质粒pET30a(+)-H和PGEX-4T-1-F,并将重组质粒转化至宿主菌E.coliBL21(DE3)感受态,IPTG诱导表达目的蛋白,经亲和层析纯化后与弗氏佐剂混合免疫新西兰大白兔,收集血清,制备多克隆抗体,利用间接免疫荧光(IFA)方法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体与抗原的结合能力.结果 分别对重组质粒进行酶切,pET30a(+)-H切出约1 653 bp的PPRV H基因,PGEX-4T-1-F切出约为1 245 bp的PPRV F基因,与预期一致.经IPTG诱导后重组蛋白以包涵体的形式表达,Western blot检测原核表达的两个目的蛋白均能与标签抗体发生反应,ELISA检测原核蛋白抗原能与相应多克隆抗体相结合,间接免疫荧光试验显示兔多克隆抗体能够识别表达PPRV H蛋白的重组狂犬病病毒(rSRV9-H)和表达PPRV F蛋白的重组狂犬病病毒(rSRV9-F).结论 利用原核表达系统成功表达出具有抗原性的PPRV China/Ti-bet/Geg/07-30株F和H蛋白,并制备了高特异的兔多克隆抗体,为建立针对PPRV H、F蛋白抗原的鉴定及亚单位疫苗的研究奠定了基础.
分类号： R373
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