鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法的建立与应用评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李博

作者： 李博;崔燕;安静;古丽阿依·包开西;罗勇军;王信惠;黎唯;王效俊

作者机构：

关键词： 鼠疫耶尔森菌;多重荧光定量PCR方法;内标对照;评价

期刊名称： 疾病监测

ISSN： 1003-9961

年卷期： 2022 年 37 卷 005 期

页码： 657-660

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 建立一种鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法,并进行应用效果评价.方法 选择鼠疫菌染色体YPO0393基因与pMT1质粒caf1基因为靶基因,设计合成YPO0393-内标模板、特异性引物和TaqMan荧光探针,构建鼠疫多重荧光定量PCR内标检测体系;对非鼠疫菌DNA、不同稀释浓度鼠疫菌DNA、野外监测样本进行检测,评价该方法的特异性、灵敏性、重复性和应用效果.结果 采用多重荧光定量PCR内标方法,8株鼠疫菌DNA均出现明显的扩增曲线,12株非鼠疫菌DNA未显示扩增曲线,提示该方法特异性良好.不同浓度的鼠疫EV76疫苗株DNA,检测最低限为22.5×10-4 ng/μL,变异系数为0.99~3.42,提示灵敏性、重复性较好.105份野外监测样本中,荧光定量PCR内标方法检测阳性的6份,与普通PCR方法检测结果一致,4份样本分离培养出鼠疫菌且采用PCR方法检测阳性.结论 通过设置双靶基因与内标对照,本研究建立的鼠疫多重荧光定量PCR内标方法可降低检测假阳性率,特异性、灵敏性和重复性理想,可用于鼠疫快速检测.

分类号： R211%R516.8

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