抗牛结核分枝杆菌VHH抗体T7噬菌体库的构建与筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨艳丽

作者： 杨艳丽;张齐;张星星;许龙;黄新;吴桐忠;韩猛立;钟发刚;张小莺

作者机构：

关键词： 牛结核分枝杆菌;Ag85B蛋白;VHH抗体;T7噬菌体展示

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2019 年 39 卷 010 期

页码： 1987-1993

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得抗牛结核分枝杆菌的VHH纳米抗体,本研究利用牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白免疫双峰驼,免疫效价达到1∶8 000后采外周血分离淋巴细胞,提取RNA反转录成cDNA,利用巢式PCR方法扩增出编码单域抗体VHH的400 bp基因片段.将目的片段用限制性内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切,与T7噬菌体载体臂T7Select 10-3RI Arms连接,再通过体外重新包装含目的片段的噬菌体.对建立的VHH噬菌体抗体库进行鉴定,原始文库库容为5.7×108 PFU,库阳性率为85.7%.通过4轮生物亲和淘选,筛选并表达出2株高特异性的VHH抗体,均对牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白具有特异性.本研究为进一步探讨VHH抗体在牛结核病的诊断和治疗奠定了基础.

分类号： S852.61%R535

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