霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈丽

作者： 陈丽;欧阳凤秀;钱炳俊;任宏;王强;姜庆五;王玉炯;刘静波;梁婉琪;潘爱虎

作者机构：

关键词： 霍乱毒素B亚单位;胰岛素B链;融合基因CTB-INSB;原核表达;神经节苷脂GM1

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1003-3505

年卷期： 2005 年 21 卷 04 期

页码： 56-61

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 构建了霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素(insulin)B链的融合基因 CTB-INSB,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIB;并将该 质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后的表达产物经15％SDS-PAGE分 析表明可以表达融合蛋白,其分子量约为15.4kDa,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的 30％。含CTB-INSB重组蛋白的包涵体经变性和复性后,可在体外自组装成五聚体结构。Western blotting分析结果显示CTB-INSB可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,表明该蛋白具有 霍乱毒素B亚单位与胰岛素的双重抗原性。同时GM1-ELISA分析结果表明CTB-INSB在体外可 与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异结合,进一步证实了它能够形成类似CTB五聚体的 高级结构,具有生物活性。

分类号： R346

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