人分化抑制因子Id-3基因在大肠埃希菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林燕

作者： 林燕;童铁钢;穆丹梅;白宇;杨木蕾;郑敏;吴东来

作者机构：

关键词： 人分化抑制因子3(Id-3);表达;纯化;多克隆抗体

期刊名称： 中国现代医学杂志

ISSN： 1005-8982

年卷期： 2008 年 23 期

页码： 3446-3449

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的在大肠杆菌中表达人Id-3与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-3的多克隆抗体。方法从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Id-3融合蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-3融合蛋白,并以此为抗原制备多克隆抗体。结果经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-3基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子量为39000GST-Id-3融合蛋白。ELISA和琼扩试验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-3融合蛋白发生特异性反应。结论Id-3基因在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-3及其在各种组织中的表达水平提供了一种检测途径,也为分析Id-3分子结构、抗原表位和生物学功能奠定了基础。

分类号： R392

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