稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 田宏

作者： 田宏;吴锦艳;龚真莉;郑海学;孙世琪;尚佑军;刘湘涛;谢庆阁

作者机构：

关键词： 猪水疱病病毒P1基因;重组逆转录病毒载体;PK-15细胞;基因表达

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2008 年 39 卷 04 期

页码： 478-482

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。

分类号： S852.65

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