节瓜ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵芹

作者： 赵芹;谢大森;罗少波;彭庆务;李明珠;李海达

作者机构：

关键词： 节瓜;ISSR-PCR;正交优化;梯度PCR;退火温度

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2014 年 0 卷 09 期

页码： 89-96

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在开展节瓜种质资源分类鉴定与遗传多样性研究。通过正交试验设计与单因素分析相结合的方法,对节瓜ISSR-PCR反应体系5个因素(模板DNA浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度与Taq聚合酶浓度)在4个水平上进行优化分析,建立了节瓜稳定可靠且具丰富多态性的最佳反应体系,进而对引物退火温度进行梯度试验分析。结果表明,20μL节瓜ISSRPCR最佳反应体系为70 ng模板DNA、0.2 mmol/L dNTP、1.2 mmol/L Mg2+浓度、0.96μmol/L引物、0.8 U Taq DNA聚合酶和2.0μL10×buffer;引物IS807最佳退火温度为53℃。以此为基础,利用4条引物对4份节瓜种质进行最佳反应体系稳定性验证,证明该体系稳定可靠、扩增谱带清晰、多态性丰富且重复性较好。

分类号： S642.9

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