荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵圣国

作者： 赵圣国;王加启;刘开朗;李旦;于萍;卜登攀

作者机构：

关键词： 瘤胃脲酶;分离纯化;活性电泳;LC-MS/MS;蛋白质组

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2010 年 41 卷 06 期

页码： 692-696

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶。从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物,通过离心和超声破碎的方法得到不含菌体细胞的瘤胃液(CFRF)和瘤胃菌体蛋白液(RCP),利用85%硫酸铵盐析,并透析后,用HiTrap Capto Q离子交换层析柱纯化脲酶。将纯化后的脲酶用活性PAGE分离,并利用改良的Fishbein染色法,确定脲酶条带位置,切胶,经胰蛋白酶消化后,用LC-MS/MS分析,并用SEQUEST软件在NCBI数据库搜索与质谱信号相匹配的肽段和蛋白质。结果表明从CFRF和RCP中分离出较高活性的脲酶,但经染色后只有RCP脲酶显示活性条带。经质谱分析,最终鉴定出了3种微生物来源脲酶,分别与嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、唾液链球菌(Streptococcus salivarius)和嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)相似。这说明绕过纯培养微生物,直接从瘤胃中分离脲酶,来研究其性质和来源是可行的,尤其适合对未培养微生物的研究。

分类号： S823

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