木薯MeMLO12基因克隆及其CRISPR-Cas9表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 蔡吉苗

作者： 蔡吉苗;李博勋;黄贵修;李超萍;时涛;王国芬

作者机构： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室/海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室

关键词： 木薯;MeMLO12基因;克隆;表达分析;CRISPR-Cas9载体;构建

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 1528-1537

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： MLO基因是植物中特有的一类抗病性负调控因子，该基因突变导致植物产生广谱抗病性。本研究从木薯全基因组中克隆获得木薯MLO12基因的DNA和cDNA序列，并将其命名为MeMLO12。该基因全长3743 nt、编码区（ORF）全长1728 nt，具有一个完整的开放阅读框，含有15个外显子和14个内含子，编码586个氨基酸，蛋白的分子质量为67.2 kDa，等电点为8.85。该基因编码的蛋白定位在内质网膜上，无信号肽，在23～45、74～96、161～183、285～307、312～334、371～393、413～435 aa处形成7次跨膜结构域。qRT-PCR定量分析发现，受木薯黄单胞病菌侵染后，MeMLO12基因在木薯抗、感品种中的表达量存在明显的差异，参与木薯与黄单胞菌之间的互作，表现出负调控作用。选择该基因第11个外显子进行Snap Gene Viewer分析，获得了10 455条sgRNA的种子序列，从中选取3条靶序列约23 nt，碱基组成上3'末端含G结尾，将其构建到CRISPR-Cas9载体上，经验证，确认MeMLO12的3条靶序列已经成功构建到基因编辑载体上，将其命名为pSGR-Cas9-AT-MeMLO12载体。

分类号： S533

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