铁皮石斛DoLIS基因克隆与茉莉酸甲酯诱导表达分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林江波

作者： 林江波;邹晖;王伟英;戴艺民

作者机构：

关键词： 铁皮石斛;芳樟醇合酶;基因克隆;表达分析;茉莉酸甲酯

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2020 年 010 期

页码：

收录情况： CSCD

摘要： [目的]克隆铁皮石斛(Dendrobium officinale)芳樟醇合酶(linalool synthase, LIS)基因,分析该基因在铁皮石斛开花期花、叶、茎和根中的表达及茉莉酸甲酯(Methyl Jasmonate, MeJA)诱导表达模式,以期为进一步鉴定其功能及分析铁皮石斛单萜类代谢机制奠定基础.[方法]利用RACE-PCR和RT-PCR技术克隆DoLIS基因全长cDNA序列和开放阅读框(open reading frame, ORF),利用ProtParam和BLAST P在线软件进行理化性质分析和氨基酸同源性比对,采用MEGA 6.0构建系统进化树.利用qPCR方法分析DoLIS基因在开花期铁皮石斛花、叶、茎和根中的表达及MeJA处理后叶片中的表达模式.[结果]DoLIS基因cDNA序列全长2 844 bp,含有1个2 538 bp的ORF,编码845个氨基酸.分子量为98.298 kD,理论等电点为7.04,不稳定系数是46.29,属不稳定蛋白.DoLIS蛋白具有TerpenecyclaseplantC1保守结构域.系统进化分析表明,DoLIS与其他物种的(S)-(+)-LIS聚在同一支,与姬蝴蝶兰(XP020576697)的LIS亲缘关系最近.qPCR分析结果显示,DoLIS基因在铁皮石斛开花期叶片中的相对表达量最高,在MeJA处理后相对表达量呈先上升后下降的趋势,处理后5 h相对表达量达到最高,是诱导前的3.88倍.[结论]本研究克隆了铁皮石斛DoLIS基因cDNA全长,该基因在叶片中的相对表达量极显著高于花、茎和根中的表达量.MeJA处理能显著诱导DoLIS基因的表达.

分类号： S567.239

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