RPL11基因稳定敲低细胞系的构建及验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘伟

作者： 刘伟;郭佩东;贾楠楠;孙英杰;谭磊;刘炜玮;仇旭升;廖瑛;宋翠萍;丁铲;孟春春

作者机构：

关键词： RPL11;稳定敲低细胞系;新合成蛋白;细胞活力

期刊名称： 中国细胞生物学学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 006 期

页码： 1241-1248

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 针对RPL11基因设计三条不同的shRNA,并分别克隆至带绿色荧光标签的pRNAT-U6.1载体,以用于构建RPL11稳定敲减的细胞系。将重组质粒转染至HeLa细胞中并加入G418进行筛选,随后通过有限稀释法将阳性细胞亚克隆纯化。将扩大培养的亚克隆细胞进行Western blot和qPCR实验验证获得RPL11基因稳定敲低的细胞株。利用CCK-8细胞活力检测试剂盒和Puromycin标记法测定RPL11基因稳定敲低细胞系的生长活力和新生蛋白合成能力,结果表明,RPL11基因稳定敲低后并不影响细胞的活力和新生蛋白合成能力,该细胞系为后续研究RPL11的非核糖体功能奠定了基础。

分类号： Q78

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