基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 马艳平

作者： 马艳平;郝乐;梁志凌;马江耀;李盈;柯浩;刘振兴;曹俊明

作者机构：

关键词： 鲤疱疹病毒3型;ORF65;B细胞表位融合表达;rProtein G亲和层析;ELISA;抗体特异性检测

期刊名称： 南方水产科学

ISSN： 2095-0780

年卷期： 2018 年 03 期

页码： 113-119

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将p ORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合成的截短ORF65(truncated ORF65)插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-trun ORF65;进一步采用DNAstar、ABCpred、Bepi Pred 1.0软件预测了p ORF65的5个B细胞表位优势区段,以合成的截短ORF65为模板,通过SOE-PCR将5个B细胞表位优势区段编码序列融合后插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-mod ORF65。重组质粒分别转入BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析,p ET32a-mod ORF65获得高效表达,表达的融合蛋白分子量为56.4 k D。此外,利用r Protein G亲和层析纯化了锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)血清Ig M,免疫小鼠,制备了鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体。在上述研究的基础上,将纯化的p ORF65作为包被抗原,鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体作为检测抗体,建立了间接ELISA方法,该方法可以检测p EGFP-ORF65 DNA疫苗免疫锦鲤后产生的特异性抗体。

分类号： S942

  • 相关文献

[1]基于鲤疱疹病毒3型ORF65基因的DNA疫苗对建鲤鱼苗的免疫保护研究. 李盈,刘振兴,马艳平,曹俊明,马江耀,郝乐,梁志凌,柯浩,李玉谷. 2019

[2]鲤疱疹病毒3型焦磷酸测序检测方法的建立. 郑树城,王庆,李莹莹,曾伟伟,王英英,刘春,石存斌. 2017

[3]3型鲤疱疹病毒白介素10单克隆抗体制备与鉴定. 陈静,张艳维,刘琴,朱晓真,贾钊,王俊亚,高娃,贾智英,桂朗,邹钧. 2024

[4]黑龙江地区鲤疱疹病毒3型的流行病学调查及其主要囊膜蛋白的抗原表位预测. 李渊,徐黎明,赵景壮,刘淼,任广明,尹家胜,纪锋,卢彤岩. 2017

[5]鲤疱疹病毒3型ORF136基因编码蛋白多克隆抗体的制备与鉴定. 郑树城,李莹莹,王庆,曾伟伟,王英英,任燕,石存斌. 2018

[6]鲤疱疹病毒3型T分离株主要免疫原性蛋白的鉴定. 郑树城,王庆,李莹莹,王英英,曾伟伟,任燕,石存斌. 2018

[7]间接ELISA检测鸡大肠埃希氏菌菌毛抗体方法的建立. 黄金海,丁伯良,王英珍,赵雪,张健,李秀丽. 2001

[8]间接ELISA检测禽多杀性巴氏杆菌抗体中包被抗原的选择. 龚建森,施祖灏,单艳菊,陆俊贤,葛庆联,刘学贤. 2007

[9]双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究. 边慧慧,蒋继志,黄健,李珊珊,王秀华. 2009

[10]水产品中孔雀石绿残留检测的ELISA与HPLC法的比较. 史东杰,孙向军,梁拥军,孙砚胜,马峻峰,张欣. 2009

[11]间接ELISA检测禽多杀性巴氏杆菌抗体中包被抗原的选择. 龚建森,施祖灏,单艳菊,陆俊贤,葛庆联,刘学贤. 2008

[12]山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂盒的研发及应用. 文正常,潘淑惠,王璇,蔡一鸣,万一元. 2011

[13]植酸酶单克隆抗体的制备及鉴定. 胡骁飞,魏凤仙,李青梅,职爱民,王方雨,孙亚宁,柴书军,付晓鹤. 2012

[14]百菌清人工抗原的合成及多克隆抗血清的制备. 王玲玲,职爱民,胡骁飞,邓瑞广,侯玉泽. 2012

[15]新城疫病毒xx08株HN蛋白主要抗原区的原核表达及其在抗体检测中的应用. 阮涛,孙国鹏,王丽,李鹏,朱艳平,王选年. 2015

[16]山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂合盒的研发及应用. 文正常,潘淑惠,王璇,蔡一鸣,万一元. 2011

[17]林芝市两区县藏猪流行性腹泻血清学调查. 胡剑武,周海娟,泽仁群西. 2019

[18]抗苏云金芽孢杆菌Cry1B毒蛋白质单链抗体的筛选与鉴定. 徐重新,张霄,刘媛,王耘,张存政,刘贤进. 2012

[19]重组NP蛋白抗原检测SIV抗体间接ELISA方法的建立. 王方昆,袁秀芳,刘思当,张存,徐丽华,王一成. 2008

[20]复合性状转基因玉米外源蛋白的时空表达规律. 龙丽坤,李飞武,李葱葱,武奉慈,宋新元. 2014

作者其他论文 更多>>

微信小程序