伽氏疏螺旋体尚志株P66基因的原核表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 于培发

作者： 于培发;刘志杰;牛庆丽;杨吉飞;王振国;翟斌涛;潘玉平;关贵全;罗建勋;殷宏

作者机构：

关键词： 伽氏疏螺旋体尚志株;P66;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2017 年 44 卷 01 期

页码： 214-220

收录情况： 北大核心

摘要： 为获得伽氏疏螺旋体尚志株(B.garinii SZ)的P66蛋白,本研究从培养的螺旋体菌液中提取总RNA,反转录合成第一链cDNA,利用PCR扩增P66基因。将目的片段连接表达载体pET-30a(+),并转化大肠杆菌表达菌BL21(DE3),经PCR、双酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达和纯化,然后将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE结果显示,获得约70ku的表达产物;Western blotting分析表明,表达产物与抗His标签的小鼠单克隆抗体、螺旋体鼠源阳性血清、兔抗P66多克隆抗体均能发生反应,获得的多克隆抗体也可识别天然蛋白。本试验成功表达了B.garinii SZ株P66蛋白,并制备了多克隆抗体,为后续B.garinii SZ株P66蛋白的功能研究奠定了基础。

分类号： S852.6

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