农杆菌浸种法介导中华结缕草遗传转化体系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 雷江丽

作者： 雷江丽;王丹;吴燕民;刘水;吕慧

作者机构：

关键词： 中华结缕草;农杆菌浸种法;遗传转化

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2009 年 17 卷 05 期

页码： 125-131

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以中华结缕草(Zoysia sinica Hance)萌动种子为转化受体,利用新霉素磷酸转移酶基因(neomycinphos photransferaseⅡ,nptⅡ)作为筛选基因,对影响根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化外部因素进行了实验,通过优化转化条件,建立了农杆菌浸种途径介导的中华结缕草遗传转化体系。结果表明,利用催芽6～7d的种子,加入OD600为0.9的农杆菌浸染菌液(在浸染菌液中添加100μmol/L乙酰丁香酮),附加5min抽真空并在迅速恢复常压后再抽真空30s的处理,振荡浸染48h,共培养3d后用75mg/L卡那霉素筛选能够获得较好的转化效果。通过对卡那霉素抗性苗进行PCR检测和GUS组织化学染色,初步验证nptⅡ和β-葡萄糖苷酶基因(β-glucuronidase,gus)已经整合进植物基因组,阳性转化率为55.21%。

分类号： S188`S688.4

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