基于塞内卡病毒A猪源中和性Fab抗体的竞争ELISA检测方法的建立与评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 梁玉斌

作者： 梁玉斌;马雪青;何宜轩;王彩荷;李坤;李平花;付元芳;卢曾军;杜晓华;刘霞;孙普

作者机构：

关键词： 塞内卡病毒A;竞争ELISA;中和抗体;诊断检测

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2025 年 41 卷 007 期

页码： 2748-2759

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 塞内卡病毒病是由塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)引起的一种主要感染猪的病毒性传染病,监测其流行情况对防控具有重要意义.为了建立一种快速检测SVA中和抗体的ELISA检测方法,本研究利用HEK293F细胞表达SVA特异性猪源Fab(fragment of antigen binding)抗体,经间接ELISA、免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)、病毒中和实验(virus neutralization test,VNT)、蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)等方法验证Fab抗体的生物学活性,将其用生物素标记后作为竞争抗体,以竞争ELISA(competitive ELISA,C-ELISA)反应模式建立一种SVA中和抗体C-ELISA检测方法,并对其敏感性、特异性、重复性、与VNT的符合率进行测定.结果表明,成功制备了1株具有中和活性的Fab抗体,且与SVA之间有较高的亲和力,将其命名为1M33Fab,用生物素标记后命名为Bio-1M33Fab;确定C-ELISA方法的SVA粒子最佳包被浓度为1μg/mL、Bio-1M33Fab最适工作浓度为0.5μg/mL、待检血清样本最佳稀释比例为1∶10、酶标亲和素最佳稀释比为1∶30 000;确定抑制百分率(percent inhibition,PI)为47%时,敏感性和特异性最高,分别为96.88%和100%,且与常见的主要猪病毒病阳性血清不发生交叉反应;批内变异系数范围为1.12%-7.34%、批间变异系数范围为1.10%-8.97%,表明重复性较好;利用该方法和VNT同时检测了 224份临床猪血清样本,2种方法的符合率为93.75%.本研究利用SVA猪源Fab抗体成功建立了一种检测SVA中和抗体的C-ELISA方法,为开发检测试剂盒产品奠定了基础.

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