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大鲵柱状黄杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

文献类型： 中文期刊

作者： 余波 1 ; 罗永成 2 ; 徐景峨 1 ; 周思旋 1 ; 杨莉 1 ; 马永兵 3 ;

作者机构： 1.贵州省畜牧兽医研究所

2.贵州省水产技术推广站

3.贵阳市水产技术推广站

关键词： 大鲵;柱状黄杆菌;荧光定量PCR;16S rRNA基因

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2014 年 41 卷 21 期

页码： 144-148

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据Gen Bank中柱状黄杆菌16S r RNA序列,设计1对特异性引物,PCR扩增获得16S r RNA基因片段,并克隆到p MD-18T载体上作为阳性标准品。通过对SYBR Green I荧光定量PCR反应条件的优化,建立了黄杆菌的SYBR Green I荧光定量PCR诊断方法 ,以此为基础研制试剂盒。试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、迟缓爱德华、弗氏柠檬酸杆菌均无阳性信号扩增,重复性好,灵敏度可达12拷贝/μL。结果表明,研制的柱状黄杆菌SYBR Green I实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等特征,适合于大鲵临床样品的检测。

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