文献类型： 中文期刊

作者： 张宝太 ¹ ; 肖丽 ¹ ; 钟纯燕 ¹ ; 周金柱 ¹ ; 黄金 ¹ ; 袁雪松 ¹ ; 蔡旭航 ¹ ; 李思远 ¹ ; 郭荣利 ¹ ; 李基棕 ¹ ; 李彬 ¹ ; 主性 ¹ ;

作者机构： 1.贵州大学动物科学学院;江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室;黔南民族职业技术学院生物工程系;西北农林科技大学动物医学院;江苏大学生命科学学院食品与生物工程学院;南京农业大学动物医学院

关键词： PDCoV;真核表达;抗原性分析

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 08 期

页码： 86-92

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在获得猪δ冠状病毒(PDCoV)结构蛋白并评价其免疫原性。通过RT-PCR技术，扩增PDCoV CZ2020株中完整的S、E、M和N基因，克隆至pCAGGS真核表达载体，构建pCAGGS-PDCoV-S、pCAGGS-PDCoV-E、pCAGGS-PDCoV-M、pCAGGS-PDCoV-N真核表达质粒，经测序鉴定后转染HEK293T细胞，采用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot(WB)方法检测PDCoV的S、E、M、N蛋白表达。将4种蛋白分别皮下注射BALB/c小鼠，制备重组蛋白多克隆抗体，并用WB法和IFA法测定抗体效价，评价免疫原性。结果表明，重组质粒pCAGGS-PDCoV-S、pCAGGS-PDCoV-E、pCAGGS-PDCoV-M、pCAGGS-PDCoV-N能够在HEK293T细胞内正常表达，并与PDCoV阳性猪血清特异性结合。制备的4种重组蛋白的多克隆抗体效价可达1∶10 000以上，表明重组蛋白可诱导小鼠产生高水平抗体。本研究制备的多克隆抗体具有较强的免疫原性，能够为研制诊断试剂盒和新型疫苗提供基础。