文献类型： 中文期刊

作者： 赵艳敏 ¹ ; 刘惠莉 ² ; 邢继兰 ² ; 潘洁 ² ; 曹祥荣 ² ;

作者机构： 1.南京师范大学生命科学学院

2.南京师范大学生命科学学院,上海农业科学院畜牧兽医研究所,上海市农业遗传育种重点实验室 上海201106,上海农业科学院畜牧兽医研究所,上海市农业遗传育种重点实验室,上海201106,上海农业科学院畜牧兽医研究所,上海市农业遗传育种重点实验室,上海201106,南京师范大学生命科学学院,,江苏南京210097上海市农业遗传育种重点实验室,上海201106,上海201106,上海201106,上海201106,江苏南京210097

关键词： 大肠杆菌不耐热肠毒素;突变体;表达

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2008 年 30 卷 01 期

页码： 30-34+52

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用重叠延伸PCR扩增技术,体外获得大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)突变体LTK63、LTR72和LTG192全基因片段,酶切和测序结果表明构建的表达载体pET30a-LT、pET30a-LTK63、pET30a-LTR72、pET30a-LTG192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换。诱导表达产物用SDS-PAGE检测,野生型LT蛋白及3个突变体均表达出约33.0Ku和13.0Ku的2个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量大小相吻合;Westernblot检测,2个蛋白带均可与抗His抗体发生特异性免疫反应,而13.0Ku的蛋白带还可与抗霍乱毒素(CT)抗体发生免疫学反应。ADP-核糖转移酶活性试验分析,各突变体蛋白酶活性均低于野生型LT蛋白,但仍保留一些酶活性。Patent-mouse毒性试验检测,LTK63、LTR72和LTG192突变体蛋白的毒性均有不同程度降低,LTK63毒性降低最显著,LTG192蛋白毒性相对较大。