文献类型： 中文期刊

作者： 张婷婷 ¹ ; 佟广香 ¹ ; 孙志鹏 ¹ ; 闫婷 ¹ ; 唐国盘 ¹ ; 周慧杰 ¹ ; 匡友谊 ¹ ;

作者机构： 1.上海海洋大学水产与生命学院;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所;农业农村部淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室;淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室;河南牧业经济学院;天津农学院

关键词： eomesa;斑马鱼(Danio rerio);卵巢发育;生殖障碍;qRT-PCR

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2023 年 53 卷 005 期

页码： 86-96

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： eomesa基因是T-box基因家族重要的转录因子,eomesa突变导致雌性斑马鱼(Danio rerio)生殖障碍,但其机制未知.本研究利用CRISPR/Cas9 技术构建了eomesa纯合突变系(eomesa-/-),对其进行了繁殖能力分析、卵巢组织学观察及采用qRT-PCR分析了6 个性腺发育相关基因在突变体 12 hpf(hours post fertilization)胚胎和 45 dpf(days post fertilization)、60 dpf、90 dpf 3 个胚后发育阶段中的表达水平变化,以期探讨eomesa影响雌性斑马鱼生殖障碍的机制.研究结果表明,eomesa-/-斑马鱼存在背鳍和臀鳍缺失的表型,雄鱼比例显著增加,可自然繁殖,而雌鱼不能自然排卵,但可通过人工按压腹部排出卵子并以人工授精方式获得正常发育的子代;eomesa-/-斑马鱼卵巢和输卵管形态正常,但卵母细胞发育滞后,胚胎发育观察发现突变体原肠胚外包延迟,且胚胎畸形率显著增加.qRT-PCR结果显示,原始生殖细胞标志基因dnd1 和nanos3 在胚胎发育体节期(12 hpf)突变体中的表达量显著低于野生型的表达量;dnd1、vasa和nanos3 在45 dpf时突变体卵巢组织中的表达量显著高于野生型的表达量;在90 dpf时突变体卵巢组织中cyp17a1 和amh基因的表达量显著低于野生型的表达量;而dmrt1 基因在突变体中的表达量极显著高于野生型的表达量.推测eomesa基因敲除干扰了生殖细胞的发育和分化,以及排卵机制,并影响了cyp17a1 和dmrt1 的表达,致使雌雄分化异常.