文献类型： 中文期刊
作者： 杜迎彬 1 ; 王志杰 1 ; 杨冰 2 ; 张晓华 1 ; 黄倢 2 ;
作者机构： 1.中国海洋大学海洋生命学院
2.农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所
关键词： 饱和铵盐溶液;样品保存;水生动物;RNA
期刊名称： 渔业科学进展
ISSN： 1000-7075
年卷期： 2013 年 34 卷 03 期
页码： 88-96
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本研究以凡纳滨对虾为研究对象,取其肌肉组织28℃下保存于不同饱和度和不同pH的铵盐保存液中,保存一定时间后,通过组织总RNA提取、RT-PCR法及荧光定量RT-PCR法鉴定比较选择方便有效的保存方法。结果显示,从含25mmol/L柠檬酸钠和20mmol/LEDTA的饱和醋酸铵保存液和饱和硫酸铵保存液中保存的组织中提取的RNA较完整。通过调节pH进行保存液的优化,提取RNA后的凝胶电泳、RT-PCR及荧光定量RT-PCR确定的基因拷贝数显示,从含25mmol/L柠檬酸钠和20mmol/LEDTA的饱和醋酸铵保存液(pH6.0)和饱和硫酸铵保存液(pH5.2)保存的组织中能成功地提取出大量的RNA,且RNA分子完整;通过荧光定量RT-PCR法显示新鲜组织的18SrRNA拷贝数为107Copies/mg组织,保存28d后的组织18SrRNA拷贝数可达到105Copies/mg组织,而空白对照组的18SrRNA拷贝数只有103Copies/mg组织。说明保存液对于抑制核酸降解有较好的效果。这种简便有效的保存液为样品的保存、现场采集标本及后续的分子实验奠定了基础。
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