文献类型： 中文期刊

作者： 孙俊颖 ¹ ; 刘志成 ² ; 孙敏华 ³ ; 李冰玲 ⁴ ; 沈海燕 ⁵ ;

作者机构： 1.广东农科院动物卫生研究所

2.上海市疾病预防控制中心

3.广东省农业科学院动物卫生研究所广东省兽医公共卫生公共实验室

4.广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东省兽医公共卫生公共实验室北京出入境检验检疫局

5.华南农业大学兽医学院

关键词： 鸡毒支原体;SYBR GreenⅠ;荧光定量PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2015 年 12 期

页码： 938-942

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立鸡毒支原体(MG)的快速定量检测方法,本研究根据GenBank中登录的MG 16S rDNA基因序列设计了一对引物,以MG基因组DNA为模板扩增其16S rDNA基因片段,并克隆于pMD18-T载体中,以纯化的重组质粒作为标准品建立了MG SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法在1.96×10~8拷贝/μL~1.96×10~2拷贝/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.999;最低检测限可达1.96×10~1拷贝/μL;与禽类其它呼吸道病原无交叉反应,特异性良好;批内及批间变异系数均低于2%,具有较高的重复性和稳定性。采用该方法抽检30份疑似临床样品,检出率为40%,敏感性明显高于常规PCR(33%)和血清平板凝集试验方法(23%),检测活疫苗可达到精确定量每头份2.0×10~7拷贝/μL。该研究为MG的早期诊断与净化、疫苗质量监测提供了一种新的快速定量检测技术。