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2株Cluster 3鹅源坦布苏病毒的分离鉴定及其致病性研究

文献类型: 中文期刊

作者: 陈作鑫 1 ; 陈宇欣 1 ; 潘彦林 1 ; 黄允真 1 ; 李林林 1 ; 董嘉文 1 ; 向勇 1 ; 徐志宏 1 ; 孙敏华 1 ; 张俊勤 1 ; 黄淑坚 2 ; 廖明 3 ;

作者机构: 1.广东省农业科学院动物卫生研究所

2.佛山大学生命科学与工程学院

3.仲恺农业工程学院动物科技学院

关键词: 坦布苏病毒(TMUV);分支3;分离鉴定;鹅;致病性

期刊名称: 中国畜牧兽医

ISSN: 1671-7236

年卷期: 2025 年 52 卷 004 期

页码: 1750-1762

收录情况: 北大核心

摘要: 【目的】明确Cluster 3鹅源坦布苏病毒(Tembusu virus, TMUV)基因组变异情况及其对鹅的致病性,为Cluster 3 TMUV的防控提供参考。【方法】利用BHK-21细胞对感染TMUV的鹅肝脏组织样品进行病毒分离,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、透射电镜观察进行鉴定,并测定分离株的生长曲线。对分离株完成全基因组扩增后,使用ModelFinder、MrBayes等软件对其进行遗传进化分析,并对分离株的E蛋白进行氨基酸突变位点分析;测定分离株病毒滴度后,攻毒30日龄鹅,观察鹅各组织器官临床剖检病变及组织病理变化,使用实时荧光定量PCR检测鹅各组织脏器中的病毒载量。【结果】RT-PCR成功鉴定得到2份TMUV核酸阳性病料,接种至BHK-21细胞后,60 h即可观察到明显病变。将3代病毒液IFA检测可观察到明显红色荧光,透射电镜可观察到直径约50 nm、有囊膜的病毒粒子。从发病鹅肝脏组织成功分离得到2株TMUV,分别命名为JM3与JM1205。病毒一步生长曲线结果显示,JM3和JM1205株分别在培养60和48 h时病毒滴度最高。全基因扩增结果显示,JM3和JM1205株基因组全长均为10 994 bp。遗传进化树显示,JM3和JM1205株均为Cluster 3 TMUV成员,与Cluster 3 TMUV鸡源分离株CTLN遗传距离最近。氨基酸突变位点分析结果显示,与GenBank中最早上传的TMUV毒株MM1775株相比,JM3和JM1205株的E蛋白存在多个氨基酸位点突变,其中V157A突变可能与TMUV毒力增强相关。攻毒后1 d后鹅开始出现排绿色稀粪症状,攻毒后7 d开始出现神经症状。JM3组在攻毒后14 d仍持续排毒,JM1205组排毒持续至攻毒后11 d。攻毒后6 d,鹅出现体重增长减缓、下降的情况,至10 d开始恢复缓慢上升。剖检发现攻毒组鹅出现不同程度的脾脏肿大、胰脏坏死、肝脏发白、大脑充血;此外JM3株攻毒组鹅出现卵巢出血、心包积液;JM1205株攻毒组鹅出现心脏出血。攻毒后各时间点脾脏病毒载量均最高,在攻毒后3 d达到峰值,随后逐渐下降。【结论】本研究自广东地区养鹅场分离得到2株Cluster 3 TMUV:JM3和JM1205,2株分离株均对鹅有致病性,可在鹅体内多个器官复制,引起鹅共济失调、体重下降等症状。

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