文献类型： 中文期刊
作者： 卢清侠 1 ; 李伟 1 ; 金前跃 1 ; 郭振华 1 ; 冯丽丽 1 ; 邢云瑞 1 ; 柴书军 1 ; 邢广旭 1 ; 张改平 1 ;
作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;河南农业大学生命科学学院;河南省农业科学院农业经济与信息研究所
关键词： 鹅星状病毒;刺突蛋白;单克隆抗体;抗原表位
期刊名称： 江苏农业科学
ISSN： 1002-1302
年卷期： 2022 年 50 卷 022 期
页码： 159-165
收录情况： 北大核心
摘要： 为了制备鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)刺突(Spike)蛋白的单克隆抗体,并对获得的单克隆抗体的生物学特性进行鉴定,将大肠杆菌表达的截短Spike蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和单克隆抗体的筛选来获得阳性杂交瘤细胞,并进一步利用免疫印迹和间接免疫荧光技术进行单抗的鉴定;采用ELISA技术进行单克隆抗体亚型、抗体效价的测定;同时根据GAstV XX株Spike蛋白序列合成重叠的多肽库进行单抗识别的抗原表位鉴定.共获得3株阳性杂交瘤细胞,分别命名为1A5、2B4、12E6;免疫印迹和间接免疫荧光实验显示3株单克隆抗体均与Spike蛋白具有良好的免疫反应,其中2B4、12E6可与GAstV发生反应;亚型鉴定结果显示单抗12E6、2B4为IgG2b亚类,单抗1A5为IgG2a亚类;轻链均为κ链;敏感性结果显示,抗体效价都在1:51200以上;抗原表位的鉴定结果表明单抗1A5识别的抗原表位为(EP16)ELRNRLNIADGDYVI,单抗2B4识别的抗原表位为(EP21)AGDSNPGETFQNFKM.本研究成功制备了针对GAstV Spike蛋白的单克隆抗体,并鉴定出2个新的抗原表位,为建立快速、简便的GAstV检测方法奠定了基础.
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