文献类型： 中文期刊

作者： 汪伟 ¹ ; 倪艳秀 ¹ ; 温立斌 ¹ ; 吕立新 ¹ ; 周俊明 ¹ ; 俞正玉 ¹ ; 茅爱华 ¹ ; 张雪寒 ¹ ; 李彬 ¹ ; 郭容利 ¹ ; 王小敏 ¹ ; 范红结 ² ; 何孔旺 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所

2.南京农业大学动物医学院

关键词： 猪;促炎症细胞因子;IL-1β;IL-18;荧光定量PCR

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2011 年 27 卷 06 期

页码： 289-294

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用。为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR从3D4猪肺泡巨噬细胞系中克隆和扩增了上述3个因子核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立了检测IL-1β、IL-18及β-actin SYBR GREEⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.990以上;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝;重复性好,组内变异系数均小于4%。