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桃甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术体系的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 蔡志翔 1 ; 沈志军 1 ; 严娟 1 ; 马瑞娟 1 ; 俞明亮 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院园艺研究所/江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室

关键词： 桃;DNA甲基化;MSAP;体系优化

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2016 年 44 卷 11 期

页码： 43-45

收录情况： 北大核心

摘要： 为建立适合桃的甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,简称MSAP)反应体系,以桃PCM-1R、PCM-1G为材料,对MSAP技术中的关键因素进行优化。结果表明,500 ng基因组DNA用EcoRⅠ、HapⅡ或MspⅠ各10 U(0.5μL,2 000 U/m L),37℃保温12 h,即可酶切完全;25μL选择性扩增体系中,含有2μL10倍稀释的预扩增产物、各1μL上下游引物、2.5μL 10×Taq buffer、2.5μL d NTP mix(各0.2 mmol/L)、2.5μL25 mmol/L MgCl_2、0.25μL Taq DNA聚合酶。在该体系下选用256对引物对桃叶片进行甲基化模式分析,经筛选获得23对扩增条带清晰、重复性好的引物,PCM-1R、PCM-1G总甲基化率分别为28.0%、25.7%。

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