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用毕赤酵母表达理氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因

文献类型： 中文期刊

作者： 林海鹏 1 ; 沈锦城 2 ; 尹慧祥 1 ; 张泽华 1 ; 张爱联 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室

2.海南大学农学院

关键词： β-葡萄糖苷酶;毕赤酵母;套叠PCR;基因表达;酶活力

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2012 年 22 卷 03 期

页码： 31-33

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:为提高β-葡萄糖苷酶的产量,用毕赤酵母取代理氏木霉用于生产,以弥补理氏木霉在大规模生产中的缺陷。方法:用套叠PCR法从理氏木霉基因组中扩增β-葡萄糖苷酶基因(bglⅠ)。用T4DNA连接酶和限制性DNA内酶将bglⅠ重组于P.pastoris表达载体pPIC9K的多克隆位点,获得含bglⅠ的重组表达载体pPIC9K-bglⅠ。通过电转法将其pPIC9K-bglⅠ载体转化于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性以及高表达bglⅠ酶的重组子作为工程菌。结果:用BMGY-BMMY培养基体系,在摇瓶中发酵48 h,表达BglⅠ30 mg/L,在P.pastoris中表达的BglⅠ能水解对硝基苯-β-D-葡萄糖苷具有β-葡萄糖苷酶活性。其酶活力为56 U/L发酵液。结论:通过这种方法,可以成功地用毕赤酵母表达理氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因。

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