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同源重组敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 李景芬 1 ; 于浩 2 ; 袁野 3 ; 刘娣 4 ;

作者机构： 1.湖州师范学院生命科学学院

2.吉林大学农学部畜牧兽医学院

3.公安部警犬技术学校警犬技术系

4.黑龙江省农业科学院

关键词： 猪;胎儿成纤维细胞;基因打靶;肌肉生长抑制素

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 42 卷 08 期

页码： 2972-2977

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】获得敲除肌肉生长抑制素(MSTN)基因的猪胎儿成纤维细胞。【方法】打靶载体的构建:以Neo为正筛选基因、HSV-tk为负筛选基因。在Neo的两侧分别插入同源长臂和同源短臂。同源长臂5382bp,包含MSTN基因的部分5′端,全部的exon1,intron1和exon2及大部分intron2;同源短臂844bp,包含部分exon3及3′端的部分序列。取35d胎龄的大白猪,用胰酶消化法,分离胎儿成纤维细胞并对其进行培养和建系。采用脂质体法将打靶载体导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用250μg·ml-1G418筛选7d,再用200μg·ml-1G418+2μmol·L-1GANC维持筛选。用RT-PCR法检测转染前转染后细胞MSTN基因表达量。【结果】成功构建了对猪MSTN基因部分intron2和exon3区域进行敲除的替代型打靶载体。共得到5个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中一个细胞克隆发生了正确的同源重组。转染后细胞MSTN基因表达量明显降低。【结论】获得了敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞。

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