文献类型： 中文期刊

作者： 张雪寒 ¹ ; 何孔旺 ² ; 赵攀登 ² ; 栾晓婷 ² ; 叶青 ² ; 温立斌 ² ; 倪艳秀 ² ; 李彬 ² ; 郭容利 ² ; 王小敏 ² ; 周俊明 ² ; 俞正玉 ² ; 茅爱华 ² ; 吕立新 ² ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所

2.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 肠出血性大肠杆菌O157∶H7;toxB基因;缺失株;小鼠;黏附

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 02 期

页码： 337-343

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。