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猪肥胖基因在大肠杆菌中的高效融合表达

文献类型： 中文期刊

作者： 昔奋攻 1 ; 李宁 2 ; 戴茹娟 3 ; 刘兆良 2 ; 吴常信 3 ;

作者机构： 1.新疆农科院微生物所

2.中国农业大学农业生物技术国家重点实验室

3.中国农业大学动物科技学院遗传组

关键词： 猪;肥胖基因;大肠杆菌;表达

期刊名称： 动物学报

ISSN： 0001-7302

年卷期： 2001 年 05 期

页码： 68-73

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用PCR方法扩增猪肥胖基因编码的成熟蛋白cDNA序列 ,并在 5′端加上BamHⅠ位点 ,3′端加上EcoRⅠ位点 ,将 5′端密码子CCC转变为大肠杆菌常见密码子CCG ,扩增得到 4 5 9bp的片段 ,克隆于融合表达载体pGEX 2TBamHⅠ和EcoRⅠ位点 ,酶切、测序正确 ,经 0 1mmol/LIPTG诱导表达出一条约 4 2kD的融合蛋白 ,其中 2 6kD为 pGEX 2T中带有的谷胱苷肽转移酶 ,16kD是猪肥胖基因表达产物瘦蛋白。利用非融合表达产品制备抗血清 ,检测融合表达的重组蛋白 ,Western blot为阳性。

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