文献类型： 中文期刊

作者： 宋艳华 ¹ ; 魏后军 ¹ ; 范志宇 ¹ ; 左园园 ¹ ; 胡波 ¹ ; 仇汝龙 ¹ ; 陈萌萌 ¹ ; 李明勇 ² ; 薛家宾 ¹ ; 徐为中 ¹ ; 王芳 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

2.山东青岛康大欧洲兔业育种有限公司

关键词： 兔出血症病毒经典毒株(RHDV);兔出血症病毒变异毒株(RHDV2);RT-PCR鉴定

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2016 年 32 卷 05 期

页码： 1117-1121

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-2和p MD19-T-VP60为模板,进行RT-PCR体系退火温度的优化,优化后的退火温度为58.2℃。对优化后的RT-PCR体系进行RHDV和RHDV2的敏感性试验、特异性试验,并用于检测RHDV人工感染样品和疑似临床样品,结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95拷贝和76拷贝的靶基因片段,且对支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒p MD19-T-EBHSV的检测结果均为阴性。RHDV人工感染的组织样品检出率为100%,15份临床样品中3份为经典RHDV阳性,其他均为经典RHDV及RHDV2阴性。该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2,为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑。