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猪圆环病毒2型SYBRGreen Real-time qPCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 冯华 1 ; 刘运超 1 ; 陈玉梅 1 ; 魏蔷 1 ; 张改平 1 ;

作者机构： 1.河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室;郑州大学生命科学院;河南农业大学牧医工程学院

关键词： 猪圆环病毒2型;PCV2;ORF2;SYBRGreen Real-time qPCR

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2018 年 04 期

页码： 98-103

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立一种基于SYBRGreen的猪圆环病毒2型(PCV2)荧光定量PCR诊断方法,以PCV2 ORF2基因序列为研究对象,构建p MD19T-ORF2重组质粒作为阳性标准品,设计特异性引物,对该方法的最适引物浓度、退火进行了优化,并对该方法的灵敏度、特异性、可重复性以及临床样品检出率进行了评价。结果表明,该方法引物的最佳终浓度为0. 2 mol/L,最适退火温度为55℃;检测限可达到3. 0×10~2个拷贝/mL,而普通PCR检测限在3. 0×10~4个拷贝/mL;溶解曲线分析显示,在77~79℃有单一的溶解峰出现,并与CSFV、PPV、PRRSV、PRV没有交叉反应;组内重复性变异系数为0. 29%~0. 32%,组间变异系数为0. 32%~0. 36%;此外,该方法对临床样品的检出率为81. 5%(31/38),而常规PCR为68. 4%(26/38)。因此,相比常规PCR,该方法更为快速、灵敏、特异、稳定,更适合PCV2临床样品的检测,可为该PCV2早期感染的快速检测提供新方法。

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[2]河南省及周边地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查. 焦文强,王治方,王克领,白献晓,郎利敏,李海利,朱文豪,张青娴,徐引弟. 2017

[3]猪圆环病毒病(PCVDs)的临床症状及PCV2疫苗的防控效果. 任巧玲,马强,郭红霞. 2012

[4]一例猪蓝耳病与猪圆环病毒病混合感染的诊断报告. 金磊,朱肖亭,李玉龙,张子敬,王二耀,徐照学. 2020

[5]猪圆环病毒2型靶细胞及其受体的研究进展. 李鹏,王利平,朱艳平,王选年,张改平. 2013

[6]猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立. 李鹏,郭军庆,金前跃,李青梅,李清州,万博,王选年,王川庆,张改平. 2014

[7]猪圆环病毒2型ORF2基因片段的克隆与原核表达. 祁艳华,王爱萍,李学伍,游雷鸣,史平玲,胡峰,张改平. 2010

[8]猪圆环病毒2型重组Cap蛋白体外稳定性研究. 刘肖,金前跃,郭军庆,王寅彪,张腾,李鹏,陈丽颖,张改平. 2015

[9]猪圆环病毒2型的分离鉴定及其全基因组序列分析. 汪磊,赵宝磊,冯华,刘运超,魏蔷,张改平. 2018

[10]中和表位串联的PCV2b病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达与鉴定. 任春晓,冯华,张腾,蒋敏,刘运超,金前跃,张改平. 2021

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