文献类型： 中文期刊

作者： 赵慧君 ¹ ; 赵旭阳 ¹ ; 史西保 ¹ ; 陈静 ¹ ; 范小敏 ¹ ; 王丽 ¹ ; 李青梅 ¹ ; 常晓博 ¹ ; 邓瑞广 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南农业大学生命科学学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;河南师范大学生命科学学院;西北农林科技大学动物医学院

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;甲基-CpG结合结构域蛋白2;miR-373

期刊名称： 河南农业大学学报

ISSN： 1000-2340

年卷期： 2019 年 06 期

页码： 903-911+917

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了研究甲基-CpG结合结构域蛋白2 (MBD2)在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制是否有抑制作用。首先,构建MBD2的3’-UTR报告质粒,通过双荧光素酶报告结果表明MBD2是miR-373靶基因。然后用MOI=1的PRRSV感染MARC-145细胞,在24、36、48 h后分别取样,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blots试验进行检测。结果表明,PRRSV感染下调MBD2的mRNA和蛋白的表达水平。用真核表达载体pc DNA 3.1-Flag构建了MBD2的真核表达质粒pc DNA3. 1-Flag-MBD2,用pc DNA3. 1-Flag-MBD2转染MARC-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后收获细胞。TCID50的试验结果表明,过表达MBD2能降低PRRSV滴度,而qRTPCR和Western blots的结果则表明MBD2能降低PRRSV的载量;相反,MBD2的siRNA试验表明,下调表达有利于PRRSV在MARC-145细胞复制。通过基因缺失试验,构建MBD2部分结构域缺失的表达质粒,最终发现MBD2的GR与MBD结构域可能在MBD2抑制PRRSV复制起关键的作用。研究结果表明,MBD2是拮抗PRRSV的宿主内源性蛋白,并发现MBD2的GR与MBD结构域可能在MBD2抑制PRRSV复制中起关键的作用,而PRRSV可能利用miR-373来下调MBD2的表达,从而逃逸宿主对病毒的清除。