文献类型： 中文期刊

作者： 刘运超 ¹ ; 杨苏珍 ¹ ; 陈玉梅 ² ; 王聚财 ¹ ; 尚延丽 ¹ ; 魏蔷 ¹ ; 陈维聪 ¹ ; 冯华 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学实验室/农业部动物免疫学重点实验室

2.郑州大学生命科学学院

关键词： 猪细小病毒;VP2蛋白;中和性单克隆抗体;免疫过氧化物酶单层细胞试验;杂交瘤细胞株

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2021 年 012 期

页码： 155-162

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）单克隆抗体,采用血凝试验（HA）鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制（HI）效价可达1∶2¹⁶,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,采用有限稀释法进行多轮亚克隆,经免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）筛选,成功获得杂交瘤细胞株5F7和11B3,能够稳定分泌中和性单克隆抗体。单克隆抗体5F7和11B3的轻链型均为Kappa,重链型分别为IgG2a和IgG2b。经ELISA和IPMA检测,单克隆抗体5F7和11B3均能与重组PPV VP2蛋白和PPV病毒粒子发生特异反应,而与猪圆环病毒2型（PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪瘟病毒（CSFV）无交叉反应。5F7和11B3腹水针对PPV病毒反应的ELSIA效价分别为1∶10 240和1∶20 480;针对PPV感染PK15细胞的中和效价分别为1∶2¹¹和1∶2¹⁰。Western blot鉴定结果显示,单克隆抗体5F7和11B3均不与变性的VP2蛋白发生反应,说明2株单克隆抗体均识别重组PPV VP2蛋白的构象型表位。综上,成功制备了2株具有中和活性的抗PPV单克隆抗体。