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犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

文献类型： 中文期刊

作者： 王晶宇 1 ; 欧阳伟 2 ; 王永山 3 ; 夏兴霞 4 ; 诸玉梅 4 ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

2.南京农业大学动物医学院

3.南京军区军事医学研究所

4.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 犬干扰素α4(CaIFN-α4);CHO细胞;真核表达;慢病毒;绿色荧光蛋白

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2017 年 04 期

页码： 448-454

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP)。将该融合基因与真核表达载体pLeGFP连接,构建重组表达质粒pL-CaIFN-α4-GFP,并与其他3种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev和pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP)。用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀稻瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞。用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现绿色荧光,用MDCK与MDB K细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒活性,活性分别为1.39×105和2.19×104U/m L。本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了试验基础。

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